植物病毒序列怎么分析（植物病毒举例）
感染病毒的植物上的病毒DNA该怎么提取呢？ 原理是一致的。方法不同。 1植物组织提取基因组dna 一、材料 幼嫩叶子。 二、设备 移液器，冷冻高速离心机，台式高速离心机，水浴锅，陶瓷研钵，50ml离心管（有盖）及5ml和1.5ml离心管，弯成钩状的小玻棒。 三、试剂 1、提取缓冲液ⅰ：100mmol/l tris·cl, ph8.0, 20mmol/l edta, 500mmol/l nacl, 1.5% sds。 2、提取缓冲液ⅱ：18.6g葡萄糖，6.9g二乙基二硫代碳酸钠，6.0gpvp，240ul巯基乙醇，加水至300ml。 3、80:4:16/氯仿:戊醇:乙醇 4、 rnasea母液 5、其它试剂：液氮、异丙醇、te缓冲液，无水乙醇、70%乙醇、3mol/l naac。 四、操作步骤： 1. 在50ml离心管中加入20ml提取缓冲液ⅰ, 60℃水浴预热。 2. 幼苗或叶子5-10g, 剪碎, 在研钵中加液氮磨成粉状后立即倒入预热的离心管中, 剧烈摇动混匀, 60℃水浴保温30-60分钟(时间长,dna产量高), 不时摇动。 3. 加入20ml氯仿/戊醇/乙醇溶液, 颠倒混匀(需带手套, 防止损伤皮肤)，室温下静置5-10分钟, 使水相和有机相分层(必要时可重新混匀)。 4. 室温下5000rpm离心5分钟。 5. 仔细移取上清液至另一50ml离心管,加入1倍体积异丙醇,混匀,室温放置片刻即出现絮状dna沉淀。 6. 在1.5ml eppendorf中加入1ml te。用钩状玻璃棒捞出dna絮团,在干净吸水纸上吸干,转入含te的离心管中,dna很快溶解于te。 7. 如dna不形成絮状沉淀,则可用5000rpm离心5分钟, 再将沉淀移入te管中。这样收集的沉淀,往往难溶解于te,可在60℃水浴放置15分钟以上，以帮助溶解。 8. 将dna溶液3000rpm离心5分钟, 上清液倒入干净的5ml离心管。 9. 加入5μl rnasea(10μg/μl), 37℃ 10分钟, 除去rna(rna对dna的操作、分析一般无影响，可省略该步骤）。 10. 加入1/10体积的3mol/l naac及2×体积的冰乙醇,混匀,-20℃放置20分钟左右,dna形成絮状沉淀。 11. 用玻棒捞出dna沉淀,70%乙醇漂洗,再在干净吸水纸上吸干。 12. 将dna重溶解于1ml te, -20贮存。 13. 取2μl dna样品在0.7% agarose胶上电泳, 检测dna的分子大小。同时取15μl稀释20倍, 测定od260/od280, 检测dna含量及质量。 [注意] 5g样品可保证获得500μg dna, 足供rflp、pcr等分析之用。 植物病原细菌基因组中与病理过程有关的基因主要包括哪些种类 植物病毒（viruses of plants）是指感染高等植物、藻类等真核生物的病毒。早在1576年就有关于植物病毒病的记载，举世闻名的、美丽的荷兰杂色郁金香，实际上就是现在所谓郁金香碎色花病毒造成的。 绝大多数植物病毒是由核酸构成的核心与蛋白质构成的外壳组成的，极少数还含有脂肪和非核酸的碳水化合物。植物病毒核酸类型有 ssRNA（单链RNA）、dsRNA（双链RNA）、ssDNA （单链DNA）和dsDNA（双链DNA）。但绝大多数含ssRNA，无包膜,其外壳蛋白亚基或呈二十面体对称，或呈螺旋式对称排列，形成球状或棒状颗粒. 大多数植物病毒是由单一种外壳蛋白组成形态大小相同的亚基，多个亚基组成外壳。外壳内含有携带其全部基因的病毒核酸。有的植物病毒的核酸分成1～4段，分别装在外壳相同的颗粒中，如烟草脆裂病毒的RNA分成两段,分别装在两种颗粒中，分子量大的一段装在长棒状颗粒中，小的一段装在短棒中，故称二分体基因病毒；又如雀麦花叶病毒的RNA分成4段,RNA1、RNA2、RNA3和RNA4分别装在外形大小相同的3种球形颗粒中,故称三分体基因组病毒。二分或三分总称为多分体基因组病毒。 另外再补充一下： 1892年Д．И．伊万诺夫斯基与1898年M．W．拜耶林克证明，烟草花叶病为比细菌还小的病原体所引起，可通过病叶汁液传染。20世纪初，已经知道昆虫能传播植物病毒病，如叶蝉传播水稻矮缩病。1930年，Н.Н.麦金尼和汤清香发现病毒可以变异，产生致病力强弱不等的毒株,而且不同毒株之间有干扰作用。1935年,美国W.M.斯坦利第一次把烟草花叶病毒(TMV)提纯结晶,F.C.鲍登和N.W.皮里进一步证实结晶物为核酸与蛋白质所构成的核蛋白，从而揭露了病毒的本质。1939年首次在电子显微镜下看到 TMV烟草花叶病毒是杆状颗粒。1956年证明TMV的核糖核酸(RNA)能独立侵染烟草,第一次证明RNA也是遗传信息的载体。60年代将TMV外壳蛋白和 TMV的RNA在试管内重组成完整的、有侵染性的TMV颗粒。TMV的外壳蛋白的一级结构是第一个被完全测定的病毒蛋白。利用 TMV第一次证实病毒核酸的突变反映在外壳蛋白的氨基酸序列上。 其实，植物病毒不一定都是有害的，比如说：在16世纪早期，荷兰人对一种植株上有着条斑的郁金香极为珍视，不惜重金购买来装扮自己的花园。这种郁金香的颜色不是单一的，它具有缤纷杂乱的花纹，如同喷溅在一起的各种颜色。这种自然之美的奥秘是什么呢？是一种植物病毒。 植物病毒对植物生长产生的危害作用是使植物的叶或花改变颜色。正是因为病毒的侵染，使花瓣上的原有颜色上产生了花斑或条纹，使花色更加奇异、绚丽，起到对花卉的美化作用。 早在18世纪，人们就利用病毒感染引起的植物叶和花的变色，创造新的花卉品种。感染郁金香碎色病毒的杂色花，呈白色花斑和条纹。感染香石竹斑驳病毒的杂色花，也因单色花质地颜色的不同，分为白色、黄色、浅绿色、浅红色等，有五六种杂色花类型，花斑纹都不相同。虞美人杂色花单色红色花经病毒感染后，在花瓣上出现白色的细条纹，条纹间距不均，色彩鲜艳美丽。 详细介绍一下植物dsRNA病毒早在1576年就有关于植物病毒病的记载，举世闻名的、美丽的荷兰杂色郁金香，实际上就是现在所谓郁金香碎色花病毒造成的。 1892年Д．И．伊万诺夫斯基与1898年M．W．拜耶林克证明，烟草花叶病为比细菌还小的病原体所引起，可通过病叶汁液传染。20世纪初，已经知道昆虫能传播植物病毒病，如叶蝉传播水稻矮缩病。1930年，Н.Н.麦金尼和汤清香发现病毒可以变异，产生致病力强弱不等的毒株,而且不同毒株之间有干扰作用。1935年,美国W.M.斯坦利第一次把烟草花叶病毒(TMV)提纯结晶,F.C.鲍登和N.W.皮里进一步证实结晶物为核酸与蛋白质所构成的核蛋白，从而揭露了病毒的本质。1939年首次在电子显微镜下看到 TMV烟草花叶病毒是杆状颗粒。1956年证明TMV的核糖核酸(RNA)能独立侵染烟草,第一次证明RNA也是遗传信息的载体。60年代将TMV外壳蛋白和 TMV的RNA在试管内重组成完整的、有侵染性的TMV颗粒。TMV的外壳蛋白的一级结构是第一个被完全测定的病毒蛋白。利用 TMV第一次证实病毒核酸的突变反映在外壳蛋白的氨基酸序列上。 [编辑本段]最早的使用 在16世纪早期，荷兰人对一种植株上有着条斑的郁金香极为珍视，不惜重金购买来装扮自己的花园。这种郁金香的颜色不是单一的，它具有缤纷杂乱的花纹，如同喷溅在一起的各种颜色。这种自然之美的奥秘是什么呢？是一种植物病毒。 植物病毒对植物生长产生的危害作用是使植物的叶或花改变颜色。正是因为病毒的侵染，使花瓣上的原有颜色上产生了花斑或条纹，使花色更加奇异、绚丽，起到对花卉的美化作用。 早在18世纪，人们就利用病毒感染引起的植物叶和花的变色，创造新的花卉品种。感染郁金香碎色病毒的杂色花，呈白色花斑和条纹。感染香石竹斑驳病毒的杂色花，也因单色花质地颜色的不同，分为白色、黄色、浅绿色、浅红色等，有五六种杂色花类型，花斑纹都不相同。虞美人杂色花单色红色花经病毒感染后，在花瓣上出现白色的细条纹，条纹间距不均，色彩鲜艳美丽。 [编辑本段]特点 植物细胞最外层有以纤维素为材料构成的细胞壁，足以抵抗病毒的侵入，因而植物病毒的特点之一是必须通过寄主的伤口方能侵入。实验室内常用摩擦叶面造成轻微伤口来接种某些植物病毒。农田操作、人口移植、摘心、整枝、打杈时手沾染含病毒的汁液，均可造成病毒传染。病毒也可通过嫁接或植物根在土壤砂砾中伸长时所造成的伤口而传染。但在自然界中，植物病毒最重要的传播媒介是节肢动物门中的昆虫(见昆虫纲)和螨类（见蜱螨亚纲）。已知大约有 400种昆虫可传播200种以上的病毒,其中以叶蝉和蚜虫最为主要，仅桃蚜就能传播约70种病毒。某些昆虫传播植物病毒的一个重要特点是：病毒既能在植物体内、也能在昆虫体内繁殖。传播介体除昆虫外，还有真菌、线虫、兔丝子等。 植物病毒的另一特点是植物体内没有象高等动物那样的体液免疫和细胞免疫，感染后病毒能在植物体内无限期地存活，直到寄主死亡，或通过营养繁殖体和块茎、块根、蔓藤、枝条等继续传播。除个别的可通过花粉传染（如大麦条纹花叶病毒）外，一般植物病毒很难进入植物茎尖的分生组织，也不能通过种子传播。 绝大多数植物病毒是由核酸构成的核心与蛋白质构成的外壳组成的，极少数还含有脂肪和非核酸的碳水化合物。植物病毒核酸类型有 ssRNA（单链RNA）、dsRNA（双链RNA）、ssDNA （单链DNA）和dsDNA（双链DNA）。但绝大多数含ssRNA，无包膜,其外壳蛋白亚基或呈二十面体对称，或呈螺旋式对称排列，形成球状或棒状颗粒（图1）。大多数植物病毒是由单一种外壳蛋白组成形态大小相同的亚基，多个亚基组成外壳。外壳内含有携带其全部基因的病毒核酸。有的植物病毒的核酸分成1～4段，分别装在外壳相同的颗粒中，如烟草脆裂病毒的RNA分成两段,分别装在两种颗粒中，分子量大的一段装在长棒状颗粒中，小的一段装在短棒中，故称二分体基因病毒；又如雀麦花叶病毒的RNA分成4段,RNA1、RNA2、RNA3和RNA4分别装在外形大小相同的3种球形颗粒中,故称三分体基因组病毒。二分或三分总称为多分体基因组病毒。 |